In dit deel van de Serious Sam-serie neemt Sam het op tegen een nieuwe aartsvijand “Mini Sam”, een kwaadaardige kloon van de held Sam “Serious” Stone. Mini Sam heeft de controle over de timelock overgenomen en reist door de tijd om oude beschavingen uit te roeien – en het is aan Serious Sam om hem te stoppen.
Het spel neemt de speler mee door meer dan 40 levels op drie historische locaties; Oud Rome, feodaal China en het legendarische Atlantis. De PS2-versie biedt online multiplayer-ondersteuning voor maximaal 8 spelers via de breedbandadapter en twee spelers op één PS2, terwijl de GC-versie 4 spelers toestaat om het tegen elkaar op te nemen op één GameCube.
Competitieve multiplayermodi zijn onder andere Deathmatch, Hold the Flag en Pass the Bomb. De volledige singleplayer-campagne kan coöperatief worden gespeeld, waarbij twee spelers elkaar kunnen helpen de meedogenloze legers van Mental en Mini-Sam te bestrijden.



